ИГХ

Этапы проведения гистологического и иммуногистохимического исследования

После того, как выбран метод забора материала от пациента (биопсия, оперативное вмешательство в объеме удаления органа), все выделенные фрагменты должны быть как можно быстрее доставлены в лабораторию патоморфологии. Скорость необходима для того, чтобы приблизить пациента к получению диагноза и незамедлительно начать проведение того или иного терапевтического курса. Ведь существует ряд опухолей (например, некоторые лимфомы), при которых счет идет на дни, а иногда на часы.

Весь материал необходимо погрузить в забуференный 10% формалин в соотношении 1:10 (одна часть материала к 10 частям формалина). Это позволяет непосредственно после операции начать фиксацию тканей, предотвратить их распад и, соответственно, сохранить все структуры материала в неизменном виде до момента просмотра патоморфологом.

Следует знать, что каждый отдельно выделенный фрагмент должен быть помещен в отдельный контейнер с маркировкой. Например, нефрэктомия (удаление почки) с резекцией (иссечением) диафрагмы и выделением регионарных лимфатических узлов. Отдельно помещается почка, отдельно – резецированная часть диафрагмы, отдельно – лимфатические узлы. Или: лимфатические узлы брюшной полости, образование средостения, шейные лимфатические узлы. Недопустимо «смешивать» материал в одном контейнере.

После фиксации, которая занимает от нескольких часов до, что редко, суток, материал отправляется в проводку. На этом этапе он проходит через различные спирты или специализированные растворы, что позволяет подготовить его к работе (обезжирить и дополнительно фиксировать). Существует несколько способов проводки материала. Основные – вакуумная проводка и экспресс. Экспресс проводка длится от 1,5 до 3-х часов, пригодна для любого вида материала и позволяет в наиболее краткие сроки получить готовый к работе образец. Вакуумная проводка длится до 12 часов, позволяет подготовить различные типы тканей, в том числе и наименее фиксированные, а также позволяет «загружать» материал на выходные и получать его в готовом виде в понедельник, что экономит время.

После проводки все образцы заливают в парафин в специальные формы (гистологические кассеты, парафиновые блоки), в которых они застывают. Здесь (в парафине) весь материал хранится вечно.

После заливки в парафин материал поступает в кабинет к лаборантам, где и происходит один из самых важных этапов работы – приготовление гистологических препаратов. На специальных аппаратах – микротомах – лаборант делает срезы с парафиновых блоков толщиной до 1,0мкм и укладывает их на специальные гистологические стекла.

Недаром здесь употреблены слова «важный этап». На сегодняшний момент невозможно представить ни одну лабораторию без хороших лаборантов, на 100% профессионально владеющих своими навыками. Без их полной самоотдачи весь последующий этап (а именно работа врача) сводится на нет. От хорошо приготовленного препарата зачастую зависит половина успеха в постановке диагноза. И это не просто слова. Очень важно получить срез нужной толщины, где клетки лежат в один слой, а не накладываются друг на друга в несколько слоев, создавая ошибочную гиперклеточную картину. Важно видеть весь срез полностью, а не «расплывшийся» или срезанный наполовину или «в складку». Все эти моменты значительно затрудняют процесс диагностики и требуют повторного приготовления препаратов необходимого качества, что так же оттягивает момент постановки диагноза.

После укладывания срезов на стекло (с одного блока один срез на одно стекло) препараты проходят этап рутинной окраски. В настоящее время это окраска гематоксилином и эозином на первом этапе. Затем окрашенные срезы закрываются под покровную пленку, что сохраняет их от повреждения, и подаются врачу. Происходит первичный этап диагностики – описание гистологической картины. Нередко уже на данном этапе при типичной картине можно выставить тот или иной диагноз. Обычно это касается тех случаев, когда материал не содержит опухоли, неинформативен или представлен характерным доброкачественным образованием или же стандартным патологическим процессом (например, воспалением). Однако в большинстве случаев, особенно в диагностике злокачественных процессов, требуется еще несколько этапов работы.

Таковыми являются специальные гистохимические окраски и иммуногистохимическое исследование.

В настоящее время существует множество гистохимических техник, позволяющих выявить тот или иной специфический патологический процесс. Избыточный фиброз (окраска трихромом по Массон или импрегнация серебром), отдельные болезни накопления или наличие специфических гранул в клетках (PAS), туберкулез (окраска по Циль-Нильсену) и т.д. На этом нередко заканчивается весь процесс и диагноз финализирован.

Но описанная простота диагностики лишь кажущаяся. Зачастую патоморфолог сталкивается с опухолями, не имеющими типичной гистологической картины или же не относящимися к определенной их группе. Таковыми являются мелкокруглоклеточные опухоли (лимфомы, нейробластомы, рабдомиосаркомы, нейроэндокринные карциномы и др.), веретеноклеточные опухоли (гемангиомы, шванномы, нейрофибромы, гистиоцитарные саркомы, лейомиосаркомы и т.п.), а так же различные виды аденокарцином или метастазы из невыявленного первичного очага. Прогноз у каждой из приведенных для примера опухолей различен, каждая из них имеет свой прогноз, и для каждой из них свой протокол лечения. Гистологическая картина у них может быть практически одинаковой. И для того, чтобы понять, с чем же мы имеем дело, применяется третий этап диагностики – иммуногистохимическое исследование.

Данный метод основан на использовании определенных белков (антител), которые реагируя с другими белками (антигенами) опухоли, дают определенный тип реакций (ядерная, цитоплазматическая, мембранная), видимый после окрашивания хромогеном. Практически для каждой опухоли в настоящее время существует набор характерных антител (так называемая панель), применяя которую можно подтвердить или же опровергнуть тот или иной диагноз. Существует несколько способов проведения иммуногистохимического исследования, в том числе — ручной. Однако этот метод не исключает человеческий фактор и имеет высокий риск ошибок. Это обусловлено тем, что качество и достоверность реакций непосредственно зависит от того, какое антитело и на какое стекло нанесено в то или другое время рукой человека. Следовательно, усталость, невнимательность, забывчивость имеют место быть. Поэтому от такого способа проведения иммуногистохимического исследования отказались уже давно в большинстве лабораторий. Если же вы с ним столкнулись, то вероятность ошибочно выставленного диагноза велика. Полностью автоматизированному процессу, в котором практически полностью исключен человеческий фактор, на данном этапе развития медицины отдается первое место. Применение самого современного оборудования, заведомо стандартизированных реагентов и лицензированных антител, позволяет на 100% достоверно выставить диагноз в каждом конкретном индивидуальном случае.

Применение иммуногистохимического исследования возможно не только для постановки диагноза. Данный вид исследования применяется и для определения возможности проведения таргетной (специфической) терапии, а также для определения степени злокачественности образования. Или, в случае метастазов из невыявленного первичного очага, предположить источник метастазирования.

Поделиться:
  •  
  •  
  •  
  •  
ПОХОЖИЕ ЗАПИСИ
Обратный звонок RedConnect