Этапы иммуногистохимии
ОНКОЛОГИЯИммуногистохимическое исследование – это тип морфологических исследований, основанный на взаимодействии антигена опухоли (он изначально есть в опухоли) с антителом (белок, вводимый извне, во время исследования). При этом взаимодействии происходит химическая реакция, которую видно при окрашивании хромогеном. Хромоген – это вещество, которое при определенных обстоятельствах приобретает цвет. Эти окрашенные участки и есть результат иммуногистохимического исследования, их видит врач и на основании увиденной картины принимает решения о диагнозе. Как правило, для этого требуется провести несколько разных реакций с разными антителами – для каждого вида опухолей существует свой набор, называемый панелью антител.
С чего начинается иммуногистохимическое исследование
Чтобы провести такое исследование, патоморфологу потребуется образец опухоли. Получить его можно во время эндоскопических обследований, таких как ФГДС или колоноскопия, во время операции, когда небольшая опухоль может быть полностью удалена, либо с помощью трепанобиопсии, когда специальным шприцом забирается столбик ткани опухоли. Затем этот образец помещается в баночку с 10%-ным раствором забуференного формалина) и направляется в патоморфологическую лабораторию.
Что происходит с образцом в лаборатории
В патоморфологической лаборатории образец фиксируют и отправляют в проводку. Эти операции предназначены для того, чтобы максимально сохранить структуры ткани образцов, не допустить ее повреждения. После этого подготовленные и обезжиренные образцы заливают парафином, чтобы «увековечить» их. С этого момента они уже не потеряют своей структуры и смогут храниться без ограничения по времени.
Но это еще не все – пока образцы не готовы для изучения. Сначала из них нужно изготовить гистологические стекла. Для этого блоки помещают в микротом, который вырезает из блока пленки с выбранных участков толщиной до 1 мкм. Это очень тонкие пленки, для сравнения, толщина человеческого волоса в основании составляет от 50 до 100 мкм! Эти пленки помещаются на стекло, а затем окрашиваются стандартными и специальными красителями в случае гистологического исследования, затем проводится реакция с нужными антителами и обработка хромогеном, чтобы «проявить» результат реакции. Окрашивание может проводиться как вручную, так и с помощью прибора, называемого иммуногистостейнером. Автоматизация этого процесса повышает качество готовых стекол.
Интерпретация результата
На финальной стадии исследования готовые стекла попадают под микроскоп врача-патоморфолога. Результативность этого этапа зависит как от качества подготовки материала к исследованию, так и от квалификации, опыта, знаний патолога. При неверной интерпретации результата диагноз будет неверным или неточным. Поэтому все больше и больше внимания уделяется проведению повторных консультаций препаратов – пересмотров гистологических стекол. Этот подход позволяет выявить и устранить возможные огрехи диагностики.