Что такое иммуногистохимия

ДИАГНОСТИКА

Иммуногистохимия (ИГХ) – это метод локализации специфических антигенов в тканях, основанный на распознавании антигена соответствующим антителом и выявления результатов этого связывания на светооптическом уровне.

Что такое иммуногистохимияИстория ИГХ началась в 1940-х годах, когда Coons с соавторами разработали технику иммунофлуоресценции для выявления антигенов в замороженных срезах. Позже были разработаны и внедрены антитела, меченые не флуоресцентными красителями, а ферментами. Нанесение ферментной метки (пероксидаза хрена) на антитело, открытое Avrameas и Nakane с последующим воздействием визуализирующей системы, позволило увидеть окрашенный продукт реакции отмеченного антитела в световой микроскоп. Таким образом стало возможным идентифицировать клетки различных типов по их уникальным признакам (маркерам). Кроме того, метод позволил выявлять гормоны и рецепторы к ним, а также изучать синтетические и секреторные процессы.

Метод получил широкое распространение в диагностической патологии только в 1990-х. Taylor и Burns первыми успешно продемонстрировали метод на фиксированной в формалине заключенной в парафин ткани (т.е. на гистологических препаратах, приготовленных стандартным способом).

Что такое иммуногистохимияСуществуют различные способы проведения реакции. Так, наиболее часто используют прямой метод, при котором маркированные антитела антитела связываются непосредственно с выявляемым веществом. Более чувствительным является непрямой метод, основанный на том, что немаркированные первичные антитела связываются с искомым антигеном, а затем обнаруживаются при помощи вторичных меченых антител.

Для повышения чувствительности метода начали использовать многоступенчатую визуализацию (пероксидазно-антипероксидазный, авидин-биотиновый, биотин-стрептавидиновый метод) и в итоге были разработаны высокочувствительные “полимерные” методы амплификации.

С момента внедрения метода в диагностическую практику, его применение значительно расширилось, иммуногистохимическое исследование перестало быть предметом только научных исследований. ИГХ стало существенным компонентом процесса постановки диагноза и классификации опухоли.  Кроме того, с помощью ИГХ стало возможным прогнозировать дальнейшее биологическое поведение заболевания, определять возможности таргетной терапии, резистентность и чувствительность опухолевых клеток к химиотерапии.

Иммуногистохимическое исследование является очень важной частью верификации диагноза. Особенно актуальным имуногистохимическое исследование является для диагностики лимфом (в подавляющем большинстве случаев диагноз без ИГХ поставить невозможно), рака молочной железы, простаты, опухолей мягких тканей, для определения гистологической принадлежности недифференцированных опухолей и метастазов из невыясненного первичного очага.

Что такое иммуногистохимияИГХ исследование выполняется после гистологического исследования окрашенных гематоксилином и эозином препаратов. После оценки изменений патолог интерпретирует полученную информацию и только на этом этапе назначает панель анител, применимую специально для опухолей данного гистологического типа. Обычно для постановки диагноза используется несколько антител, так как важными являются не только положительные, но и отрицательные окраски. Иногда проводится один или несколько дополнительных этапов исследования. В результате гистологическое строение опухоли сопоставляется с совокупностью полученных результатов и на основании этого выставляется окончательный диагноз.

Длительность проведения ИГХ исследования зависит от метода (вручную либо с помощью специальных аппаратов для автоматической окраски) и составляет от суток до нескольких дней, а иногда и недель. Кроме того, необходимо учитывать время, затрачиваемое патологом на интерпретацию полученных данных.

Еще одним очень важным нюансом является стандартизация и воспроизводимость результатов ИГХ исследований. Так как ИГХ – это сложный и многоступенчачтый процесс, то существует огромное количество факторов, влияющих на результат. Техническая ошибка, низкое качество реагентов, нарушение фиксации проводки и/или фиксации биологического материала, неправильно выбранная панель антител, неверная интерпретация материала — всё это может привести к неверным или неполным результатам исследования. Именно поэтому желательно проведение важных исследований в хорошо оснащённых (автоматизация снижает влияние “человеческого фактора”) лабораториях с опытным персоналом.

 

Поделиться:
  •  
  •  
  •  
  •  
ПОХОЖИЕ ЗАПИСИ
Обратный звонок RedConnect